定远自卫反击战。新四军江北部队没有南移陷入圈套，反而不断壮大，使国民党顽固派十分恼怒。1940年2月底，国民党军事当局指令苏皖顽军立即进击淮南新四军。

　　1940年3月初，国民党桂系军队李品仙部以第138师先头部队1个团越过淮南铁路，配合地方顽军第10、第12游击纵队和保安第5团等共6000余人，分3路进犯驻合肥东北的新四军第4支队和驻定远东南大桥一带的江北指挥部。

　　中共中央中原局获悉后，立即动员淮南军民积极准备迎战。同时，向国民党桂军呼吁团结抗战，协商谈判，建议以淮南铁路为界，分区抗日，“我不向西，彼不向东”。李品仙部置之不理，继续挟其优势兵力进逼新四军防地。刘少奇、张云逸遂决心在韩德勤部尚未起兵之际，首先集中兵力于津浦路西，反击地方顽军，制止其东进。在路东则尽量争取韩德勤部独立第6旅中立，待路西形势缓和后，再挥戈东向，击退韩德勤部的进攻。据此，即令第4支队在滁县界牌集(今属定远县)、定远大桥地区全力抗击顽军；第5支队主力和苏皖支队由津浦路东的来安、六合地区迅速西援；江北游击纵队由含山、和县地区北进，从侧后袭击顽军，配合作战。

　　1940年3月4日，从全椒出发的顽军第10游击纵队进占界牌集，推进到江北指挥部驻地大桥附近；从定远出发的顽军第12游击纵队亦推进到大桥附近；顽军第138师一部进至八斗岭、王子城一线；保安团向青龙厂江北游击纵队进犯。新四军第4支队以第7团反击进占界牌集之顽军，以第9团保卫大桥，以第14团乘顽军第12游击纵队后方空虚之际，奇袭定远城，以诱使该顽回援。

　　当日起各部队展开英勇反击作战。南线，第7团首先将正向界牌集、大桥一线进犯之顽军第10游击纵队击溃。接着，又在王子城将遭遇之顽军第138师一部击溃。向路西增援的第5支队主力和苏皖支队越过津浦路，7日，于施家集将滁县顽保安团800余人消灭，并在管家坝击溃第10游击纵队1个营。9日，在王子城与第7团会合后，与八斗岭顽军第138师一部激战两昼夜，将其击溃。与此同时，江北游击纵队新7团袭击了含山、和县县城顽军，新8团于肥东青龙厂歼顽保安团和土顽一部。北线，第14团于4日一举攻克定远城。6日，在第9团协同下，于高塘铺截击了仓皇回援的顽军第12游击纵队，将其大部歼灭。10日，在松树刘追歼凤阳常备队一部后结束战斗。

　　此次战斗共歼顽军2000余人，其中俘支队副司令以下官兵1000余人。为了争取与国民党桂系军队团结抗战，遂乘胜收兵，再度提议和谈。路西自卫反击作战的胜利，打击了顽军的反共气焰，迫使其同意了以淮南铁路为界分区抗日的倡议。